elisa原理 ELISA的基本原理
酶联免疫吸附试验(ELISA)概述
ELISA全称为酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay),是目前应用最广泛的免疫酶技术,用于定性/定量检测抗体(抗原)。
基本原理详解
ELISA的基本原理是结合抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应。在固相载体上,抗原或抗体保持其免疫反应性,而酶标记的抗体或抗原则具有免疫学活性和酶的催化活性。通过一系列反应和显色过程,实现定性或定量分析。
ELISA大家庭成员介绍
成员一:固相载体,如聚苯乙烯,用于吸附蛋白并保持其免疫学特性。
成员二:包被用的抗原(体),通过与固相载体结合,为后续反应提供基础。
成员三:酶标抗体(原),具有酶催化活性和免疫活性,用于催化底物显色。
成员四:洗涤液和终止液,分别用于洗涤和终止反应。
四种主要ELISA方法及特点
间接ELISA:主要用于检测抗体,优点是可检测多种抗原,使用广泛;缺点是可能存在交叉反应。
竞争ELISA:既可用于检测抗体也可用于检测抗原,优点是可用于不纯样品的检测,数据再现性高;缺点是操作稍复杂。
双抗体夹心ELISA:常用于检测抗原,优点是无需事先纯化抗原;缺点是抗原需有两个以上的抗体结合位点。
双抗原夹心ELISA:以固相抗原和酶标抗原测定样品中的抗体,优点是背景干扰小、不需稀释受检抗体;缺点是技术难度较高。
ELISA试剂盒性能指标评估
特异性:保证阴性样本检出的准确性,避免与其他检测抗体(原)的交叉感染。
灵敏度:反映试剂盒对被检物质的最低检测能力,保证阳性样本检出的准确性。
精密性(又称重复性):ELISA试剂盒的板间及板内精密性应控制在一定范围内。
稳定性:包括有效期内和规定条件下的性能保持能力。
操作简便性:选择试剂盒时也应考虑操作时间及步骤的简便性。